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培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要,添加一些自身無法合成的化合物,即生長(zhǎng)因子。有些微生物,如自養(yǎng)型微生物,不需要碳源,所以上述物質(zhì)只具有一般性。
高考生物必備知識(shí)點(diǎn):培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)
培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長(zhǎng)時(shí)間的貯存,必須放在2~6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管,現(xiàn)在均改制成粉末。
高考生物必備知識(shí)點(diǎn):培養(yǎng)基
劃分標(biāo)準(zhǔn) | 培養(yǎng)基種類 | 特點(diǎn) | 用途 |
物理性質(zhì) | 液體培養(yǎng)基 | 不加凝固劑 | 工業(yè)生產(chǎn) |
半固體培養(yǎng)基 | 加凝固劑,如瓊脂 | 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定 | |
固體培養(yǎng)基 | 加凝固劑,如瓊脂 | 微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù) | |
化學(xué)組成 | 天然培養(yǎng)基 | 含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) | 工業(yè)生產(chǎn) |
合成培養(yǎng)基 | 培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成) | 分類、鑒定 | |
目的用途 | 選擇培養(yǎng)基 | 培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng) | 培養(yǎng)、分離出特定微生物 |
鑒別培養(yǎng)基 | 根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 | 鑒別不同種類的微生物 |
高考生物必備知識(shí)點(diǎn):培養(yǎng)基的配制
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào)PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進(jìn)行過濾。(有時(shí)可以省去)
5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,最多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的
三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度;
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)
基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個(gè)斜面,約占試管長(zhǎng)度的1/2。
9.貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用
注:1、選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適
3、控制pH條件
4、控制氧化還原電位
5、原料來源的選擇
6、滅菌處理
高考生物必備知識(shí)點(diǎn):選擇培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)
選擇培養(yǎng)基沒有一定標(biāo)準(zhǔn),一般遵循以下幾點(diǎn):
(1)建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基;
(2)可以查閱文獻(xiàn)或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢;
(3)平常慣用的培養(yǎng)基;
(4)許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基;
(5)用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)狀態(tài),可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷;
(6)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基,這是最客觀的方法,但比較繁瑣。
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